病毒是一種個(gè)體微小結構簡(jiǎn)單，只含一種核酸（DNA或RNA），必須在活細胞內寄生并以復制方式增殖的非細胞型生物。

病毒是一種非細胞生命形態(tài)，它由一個(gè)核酸長(cháng)鏈和蛋白質(zhì)外殼構成，病毒沒(méi)有自己的代謝機構，沒(méi)有酶系統。因此病毒離開(kāi)了宿主細胞，就成了沒(méi)有任何生命活動(dòng)、也不能獨立自我繁殖的化學(xué)物質(zhì)。

常見(jiàn)的病毒樣本保存液的設計或針對于核酸的保護，或指向病毒功能蛋白的保護。

針對核酸的樣本保存液中，通常含有DNase/RNase和其他功能酶的抑制作用，破壞功能蛋白，這一類(lèi)病毒樣本保存緩沖液更適用于pcr方法或其他分子檢測方法的使用。

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而主要保護功能蛋白的病毒樣本保存液，對于核酸的保護效果不佳，更適用于病毒抗原或抗體的檢測，比如elisa或膠體金、熒光等快速檢測的使用。

1、滅活型病毒保存液和非滅活型病毒保存液

病毒保存液主要分滅活型病毒保存液和非滅活型病毒保存液。

1）非滅活型病毒保存液

非滅活型的病毒保存溶液不含裂解鹽，可以保持病毒的體外活性以及抗原和核酸的完整性，保持不分解病毒蛋白包膜，并保持病毒樣品的原始性程度。除核酸提取和檢測外，它還可用于病毒培養和分離。

非滅活病毒保存液的成分主要以Hank's液為基礎，在Hank's液基礎上，添加了很多抑菌成分、冷凍保護劑等成分。

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Hank's平衡鹽溶液（Hank's Balanced Salt Solution, HBSS）是細胞分離或培養中常用的磷酸鹽緩沖液之一，主要成分包括NaCl、KCl、KH₂PO₄、Na₂HPO₄、NaHCO₃、CaCl₂、MgCl₂、MgSO₄和葡萄糖。Hank's平衡鹽溶液常用于組織塊的漂洗、細胞的洗滌、細胞或組織的運輸、其他試劑的配制以及作為細胞計數的稀釋液等。

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平衡鹽溶液（Balanced Salt Solution, BSS）也叫生理溶液（Physiological Solution），是集緩沖液的緩沖力、生理鹽水的等滲性以及培養液的營(yíng)養供應特點(diǎn)于一體的，具有維持滲透壓、保持PH穩定以及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養的作用，可滿(mǎn)足體外實(shí)驗中組織、器官或細胞的生存和代謝的基本需要。一些平衡鹽溶液中還添加了少量酚紅，用以指示溶液的酸堿度變化。

2）滅活型病毒保存液

滅活型病毒保存液添加有裂解鹽，可以降解樣本病毒，使其失去活性，可以有效地防止操作員繼發(fā)感染。

保存液里面含有的Tris、裂解鹽、EDTA等主要目的是裂解核酸而釋放出核酸，從而通過(guò)后續的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR進(jìn)行核酸檢測，以此判斷樣本是否含病毒特征核酸，即是否感染病毒。

它還包含抑制劑可以防止病毒核酸降解，以便進(jìn)行后續檢測，并且可以在室溫下保存相對較長(cháng)的時(shí)間，從而節省了病毒樣品的保存和運輸成本。

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滅活型病毒保存液則使用上更安全，操作環(huán)境要求也不用那么嚴格。

3、非滅活型病毒保存液的成分及作用

目前研究的病毒保存液的成分主要為Hank's液基礎、慶大霉素、真菌抗生素、BSA（牛血清白蛋白第五組分）、生物緩沖劑HEPES、氨基酸、冷凍保護劑、甘油等多種組分

1）純化水

純化水，H?O。純化水在病毒保存液中的主要作用是作為溶劑，提供一個(gè)適宜的介質(zhì)用于稀釋和混合其他成分，同時(shí)也有助于維持保存液的pH值在一個(gè)理想的范圍內，這有助于維持病毒的穩定性。

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2）葡萄糖

葡萄糖，分子式C?H??O?。葡萄糖在病毒保存液中的添加主要是為了提供一個(gè)穩定的能量來(lái)源，幫助維持樣本中可能存在的細胞的生存狀態(tài)，從而間接保護病毒的活性。

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葡萄糖也可以幫助調節保存液的滲透壓，維持一個(gè)適宜的環(huán)境，防止細胞因環(huán)境壓力變化而發(fā)生破裂或收縮。

3）甘油

甘油，分子式C?H?O?。甘油在病毒保存液中的添加主要是為了提供冷凍保護，防止樣本在低溫保存和運輸過(guò)程中病毒受損，具有穩定蛋白質(zhì)結構的作用，可以防止病毒蛋白在低溫或者是不穩定環(huán)境中變性或聚集，從而保持病毒的感染能力。

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4）氯化鈉

氯化鈉，NaCl。氯化鈉在病毒保存液中的添加主要是為了調節溶液的滲透壓和離子強度，從而提供一個(gè)適宜的環(huán)境以維持病毒的穩定性和活性。

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5）蔗糖

蔗糖，分子式C??H??O?? 。蔗糖在病毒保存液中的添加通常是為了提供冷凍保護和穩定病毒顆粒，從而保持病毒的結構和感染活性。

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6）檸檬酸鈉

檸檬酸鈉，分子式是C?H?Na?O?。檸檬酸鈉在病毒保存液中的添加主要是因為它的緩沖能力和對金屬離子的螯合作用。

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7）十二烷基肌氨酸鈉

十二烷基肌氨酸鈉，分子式C??H??NNaO?。十二烷基肌氨酸鈉在病毒保存液中主要用于增強病毒核酸的提取效率，減少病毒的感染性，以及提高樣品的處理性能，它是病毒學(xué)研究和診斷中常用的添加劑之一。

8）酚紅

酚紅能夠通過(guò)顏色的變化來(lái)指示溶液的pH變化。在酸性條件下，酚紅呈現黃色；在中性和堿性條件下，它呈現紅色到粉紅色。這種顏色變化可以幫助研究人員監控保存液的pH狀態(tài)，確保其處于適宜病毒保存的范圍內。

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雖然酚紅的主要功能是作為pH指示劑，但它本身并不調節pH值，而是用來(lái)監測和指示pH狀態(tài)。酚紅對細胞有一定毒性，在一些特定的實(shí)驗設置中，如果存在對酚紅敏感的應用（例如某些細胞培養或分子生物學(xué)實(shí)驗），可能需要考慮使用不含酚紅的保存液或培養基。

9）慶大霉素、真菌抗生素

多種抗生素聯(lián)合，具有抗細菌和抗真菌的作用。

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10）牛血清白蛋白

牛血清白蛋白（BSA）作為蛋白質(zhì)穩定劑，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點(diǎn)為4.7。

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牛血清白蛋白在生化實(shí)驗中有廣泛的應用，可在病毒的蛋白質(zhì)外殼形成一種保護膜，使其不易分解，保證病毒的完整性，提高分離率；還可在western blot中作為Blocking agent；在酶切反應緩沖液中加入BSA，通過(guò)提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性。

11）氨基酸

為病毒存活提供必需的營(yíng)養物質(zhì)。

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4、滅活病毒保存液的成分及作用

滅活病毒保存液相對于非滅活病毒保存液，主要是多了硫氰酸胍。

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a.病毒裂解

硫氰酸胍是一種有效的裂解劑，可以破壞病毒的蛋白質(zhì)外殼和脂質(zhì)包膜，從而釋放出病毒的遺傳物質(zhì)（RNA或DNA）。這一點(diǎn)對于后續的病毒核酸的提取和分析至關(guān)重要。

b.核酸穩定性

在裂解病毒并釋放出遺傳物質(zhì)后，硫氰酸胍有助于穩定這些敏感的分子，防止它們在樣品處理和存儲過(guò)程中被降解。硫氰酸胍通過(guò)破壞核酸降解酶的活性來(lái)保護核酸免受破壞。

c.抑制核酸酶活性

硫氰酸胍能夠有效抑制核酸酶的活性，這些酶如果活躍會(huì )迅速降解釋放出的RNA或DNA。通過(guò)抑制這些酶，硫氰酸胍幫助保持核酸的完整性，這對于確保病毒檢測的準確性和靈敏度至關(guān)重要。

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